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96,384 and 1536 Channel simultaneous pipettor

“ CyBio® Well vario ”
Analytik-jena의 '96,384 and 1536 Channel simultaneous pipettor'를 이용한 응용자료는 어날리틱예나코리아(유)에서 제공하였으며 주요 내용은 다음과 같다.

[ Introduction ]
Auto Liquid Handling system은 생물공학 분야의 기초실험인 PCR, DNA, RNA 정제뿐 아니라, 세포독성 실험과 같이 정밀성이 요구되는 실험을 자동화시켜 줌으로써, 최소한의 인력으로 반복실험을 가능하게 한다.
Analytik jena의 Auto Liquid Handling system인 “CyBio® Well vario”는 시료의 볼륨에 따라 Pipetting head 교환이 가능하며, Volumespectrum이 광범위하여 다양한 볼륨의 시료 분주가 가능하다. 특히, 각 Volume range에서 타사대비 최고의 정밀도를 보장한다. 또한 사용이 편리한 소프트웨어는, System을 처음 사용해보는 연구자들도 거부감없이 사용할 수 있게 한다.

이번 연구에서는 “CyBio® Well vario”의 “Nanoliter Head”를 사용하여 소량의 Compound handling 시 정확도를 테스트한 결과를 보여 주었다. 미량의 Compound를 이용한 소형화 분석이 증가함에 따라, 미량의 시료 Transfer 시 High precision에 대한 부분은 장비를 선택함에 있어 필수 검토 사항이 되었다. 시스템의 Precision이 높을수록, 세포분석을 위해 사용되는 용매의 농도를 낮출 수 있고, 불필요한 희석단계를 피할 수 있기 때문이다. “Nanoliter Head”는 96 또는 384 Ceramic tip의 Pipetting module 사용이 가능하며, 100에서 2500 Nanoliter의 넓은 Volume spectrum 내에서 정확하게 Transfer 한다. 이 연구에서는 테스트 전체의 Volume range를 테스트하기 위해 “Nanoliter Head 96, 384”를 이용한 신뢰성 있는 Pipetting procedure를 통하여 정확성 높은 Data를 보여 주었다.

[ Materials and Methods ]
- Devices
① CyBio®-Well vario Nanoliter Head 96 and 384
② Centrifuge
③ Microplate reader
④ CyBio® Tip Wash Station

- Reagents
① P-Nitrophenol(p-NP, Sigma) dissolved in DMSO.
② 96-well or into 384-well transparent flat bottom plates prefilled with 150μl or 50 μl 0.1 N NaOH solutio.
- Method
① DMSO에 녹여진 P-Nitrophenol(p-NP, Sigma)을 Model compound solution으로 사용. (농도 60mM and 240mM)
② Compound volume에 따라 96 well 또는 384 well Flat bottom plat에 Transfer.

- Transfer 후, 1,000rpm으로 10분 Shaking -> 700 x 9G에서 2분 Centrifugation. 
Centrrfugation 후 흡광값(405nm) 측정. (Microplate reader-BMG Labtechnologies)
* p-NP 농도의 Optical density는 0.5 ~ 1.5(linear range of the reader) 사이.

- Tip은 CyBio® Tip Wash Station을 사용하여 세척되어졌으며, Cleaning reagent는 Water에 10% DMSO를 용해하여 사용.
- 고농도 p-NP Solution(240Mm) 1000nl을 Pipetting 후, 동일한 Volume Water를 96 Well plate에 Pipetting 한 후 세척 효과측정. (이후 Washing cycle 5번 반복)

- Washing cycle을 거듭함에 따라 p-NP solution의 농도가 어떻게 변화되어가는지 Calibration curve를 통하여 확인.

[ Results ]
- Precision of the Nanoliter Head 96 and 384 for different volumes : Volume 200nl까지 Precision value는 2% 미만으로 측정 되어졌으며, 100nl의 Precision value handling을 위해서는 CV 값은 5% 미만이어야 신뢰성 있는 결과이다.
Table 1: Nanoliter Head 96 and 384, specified precision values and experimental data in dependence on the handled volume. Values show means of 3 plates.





- Cleaning of the Nanoliter Head 96 ceramic tips
: Ceramic tips은 CyBio® Tip Wash Station을 이용해 쉽게 세척 가능하며, Tip 바깥 부분까지도 세척이 가능하다. 한 번의 Washing cycle 후 Remaining compound solution 0.25 미만이었지만 세척 Cycle이 5번 진행 후 Blank 영역에 있는 것으로 보아, 5 Cycle 후 고농도 p-NP solution이 제거됨을 확인하였다.

Figure 1: Washing 전 Remaining compound solution(3.5%), 240mM p-NP solution 1000nl의 Pipetting 후 Tip wash Station으로 Washing cycle의 수를 다르게 하여, Washing 하였을 때 Blank 값과 동일해짐. (Nanoliter Head 96 into a 96-well plate)

- Selected application examples
: Figure2는 DMSO 내 용해되있는 240mM p-Nitrophenol solution 100nl을 96 Well Plate에 96 Head를 이용하여 Transfer한 결과 Figure3는 DMSO 내 용해되어 있는 60mM p-Nitrophenol solution 100nl을 384 well plate에 384 Head를 이용하여 Tranfer한 결과 두 테스트 모두 High precision 결과를 보여주었다.(CV = 2.36% and 2.45%)

Figure 2: 240mM p-Nitrophenol solution,100nl 1 step transfer precision. (96-well plate with the Nanoliter Head 96)


Figure 3: 60mM p-Nitrophenol solution,100nl 1 step transfer precision. (384-well plate with the Nanoliter Head 384)


[Conclusion]
- CyBio®의 새로운 Nanoliter Head는 CyBio®-Well vario의 Flexible pipetting platform을 완성 시켰으며, 이와 더불어 미량Compound handling 시 낮았던 정확도를 높이는 해결책을 제공하여 주었다.

응용 분야: Cellular assays, ELISAs, ADME-TOX, Kinase Assays, GPCRs Assays, Antibody screening.

Analytik-jena의 '96,384 and 1536 Channel simultaneous pipettor'에 대한 궁금한 내용은 본 원고자료를 제공한 어날리틱예나코리아(유)를 통하여 확인할 수 있다.

[ Reference ]
- Katrin Undisz and Peter Zimmermann, CyBio® AG, Goeschwitzer Str. 40, D-07745 Jena, Germany, www.cybio-ag.com
- Analytik jena application Note.

Model Name(제품명): CyBio® Well vario
The Person in Charge(담당자): Oh Hyeonsik
Maker(제조사): Analytik-jena
Country of Origin(원산지): Germany
e-mail: lssales@analytik-jena.kr
Data Services(자료제공): Analytik-Jena Korea

<이 기사는 사이언스21 매거진 2020년 2월호에 게재 되었습니다.>


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