Analytik-Jena의 'Semi-automatic 96- or 384-fold pipettor with Minimal required space'를 이용한 응용자료는 어날리틱예나코리아(유)에서 제공하였으며 주요 내용은 다음과 같다.
[Introduction]
Liquid Handling System은 수동 멀티 채널 피펫팅의 한계를 극복하게 하 여 분자생물학 분야 연구원들에게 많은 관심을 받고 있는 System이다. 특히 Cell-based assays, ELISA, Cell seeding, 핵산 정량분석 등의 결과에 대한 재현성을 향상시켜 시간과 비용을 절약할 수 있게 한다. CyBio® SELMA는 Semi Automatic pipettor로써 96 또는 384 Pipetting channel로 구성되어지며, System 자체의 소프트웨어를 통 하여 96 또는 384 Well microplate에 빠르고 쉽게 분주가 가능하다.
본 연구에서 사용되어진 iCell® Cardiomyocytes 심방, 결절 그리고 심 실세포를 대표하는 Human induced pluripo-tent stem(iPS)에서 유래 되어진 세포로, 독성평가를 포함한 광범위한 응용에 사용되어진다. 분석 시 필요한 Serial dilution, Compound dosing, Cell feeding 등 의 Pipetting step은 많은 시간이 소요되며, 실험자에 따라 오차가 발 생할 수 있어 결과의 정확성 및 재현성에 영향을 주게 된다.
이번 연구에서는 Cardiac cytotoxicity 화합물들이 iCell® Cardiomyocytes 세포 생존력에 미치는 영향을 확인하는 것을 목표로 하였으며, 분석에 필요한 Pipetting system은 CyBio® SELMA, 그 외 분석을 위해 필요한 Reagent 및 일부 소모품들은 타사제품을 사용하 였다. 특히 이 연구에서는 CyBio® SELMA의 User-friendliness, Speed 그리고 Consistency에 대한 부분을 평가하였다.
[ Materials and Methods ]
•Devices
① CyBio®-SELMA 96, 250μl (Analytik Jena AG, #OL 7001-26-200)
•Consumables
① CyBio®-TipTray 96, 250μl deep well sterile (CyBio AG, #OL 3800-25-659-S)
② 96 Well Flat Clear Bottom Black Polystyrene TC-Treated microplates
•iCell® Cardiomyocytes 세포에서 Cardiotoxicity assay 진행
Cardiomyocytes를 전용 Reagent를 이용하여 녹인 후, Gelatin-coated 96-well plate에 Maintenance Medium과 함께 7일 배양.
배양 기간 동안 Media 교환 시 CyBio® -SELMA 96, 250μl, Deep well tip tray를 사용.
독성물질들(Staurosporine, Imatinib, Sunitinib, Rotenone)은 Serial dilution하여 24시간 동안 iCell® Cardiomyocytes에 적용, Serial dilution 시 CyBio® -SELMA 96, 250μl 사용.
Viability는 CellTiter-Glo를 사용하여 분석.
CyBio® -SELMA 96, 250μl Method parameter는 Table 1 참고
•Compound(Staurosporine and imatinib, 100μM; Sunitinib, 300μ M; Rotenone, 300μM)들의 Serial dilutions은 각 Compound 150μl 를 Microplate 첫 번째 컬럼에 넣은 후 나머지 11개 Column에 Media transfer, Transfer시 CyBio® -SELMA 96,250μl 사용.
분석샘플은 10개의 시료를 각 3배수로 준비하였으며, Serial dilution 시 Plate 내 물질들이 잘 섞이게 하기 위하여, Mixing 후 Dilution 진행. Dilution 방향은 Column 방향, 그리고 Transfer 볼륨은 50μl로 하였으며, Pipetting은 CyBio® -SELMA 96, 250μl 사용.
[ Results and Discussion ]
•Assay를 통해 4가지 독성화합물들은 Cell viability 감소에 영향을 주는 것을 확인할 수 있었으며, 이물질의 효능은 Figure2, Table2 참고
•iCell® Cardiomyocytes의 정확성 높은 Viability 분석을 위해, 정확한 볼륨 Pipetting 가능한 CyBio® -SELMA 사용.
이전에 분석되었던 Compound들의 EC50에 대한 값은 Table2 참고.
•CyBio® -SELMA system은 빠른 Pipetting으로 Media exchange 시간을 줄여주어, 시료가 실온에 노출되는 시간을 줄여줌으로써 온도변화에 따른 시료의 변이를 최소화 시켜준다.
또한 사용하기 편리한 User-friendly software로, iCell® Cardiomyocytes 의 Media exchanges, Compound dosing에 최적화된 시스템이다.
•Pipetting speed의 조절(2μl/s to 245μl/s)의 폭이 넓기 때문에 시료 Aspiration과 Dispensing speed를 다양하게 조절 가능하다. 따라서 Pipetting 동안에 Cell layer에 줄 수 있는 피해를 최소화시켜 주며, Dispensing 시 Bubble 발생이 거의 없다.
•CyBio® -SELMA는 Assay에 사용하였던 Method parameter 가능하여, 저장된 Parameter를 사용하여 쉽고 빠르며, 정확성 높은 분석 결과를 제공해 준다. 특히나 Parameter 저장 기능은 Cell culture plate를 사용한 Serial dilution시 매우 유용하다.
이는 메뉴얼 방법 사용 시 Column들 사이 에 높이 차이로 인해 발생할 수 있는 Cell layer 파괴나 Pipetting error 를 없애주기 때문이다.
•본 Assay를 통하여 CyBio® -SELMA는 일관성 있고 정확성 높 은 Pipetting으로 뛰어난 결과를 제공하여, iCell® Cardiomyocytes의 Viability assay를 위하여 매우 효율성 높은 User-friendly system임이 확인되었다.
Analytik-Jena의 'Semi-automatic 96- or 384-fold pipettor with Minimal required space'에 대한 궁금한 내용은 본 원고자료를 제공한 어날리틱예나코리아(유)를 통하여 확인할 수 있다.
Reference(참고문헌):
•Literature : (1) iCell® Cardiomyocytes Application Note: Assaying Cell Viability, Cellular Dynamics International, Madi-son, WI.
• AN_0539_0001_en_141209 (1) iCell Cardiomyocytes Application Note: Assaying Cell Viability, Cellular Dynamics International, Madison, WI.
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Data Services(자료제공): Analytik-Jena Korea
The Person in Charge(담당자): Kim Yeonhui
Maker(제조사): Analytik-Jena
e-mail: lssales@analytik-jena.kr
Country of Origin(원산지): Germany
Model Name(모델명): CyBio® SELMA
<이 기사는 사이언스21 매거진 2020년 1월호에 게재 되었습니다.>
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